美國新創生技公司Colossal Biosciences宣布了他們復活恐狼的突破性研究，更登上了《TIME》雜誌封面，引起不少關注。恐狼（Aenocyon dirus）是生活於12萬至1萬年前（更新世晚期至全新世早期）的一種犬科動物，身高約100公分，體長約180公分，曾廣泛分布於南、北美洲地區。此次Colossal Biosciences的研究團隊從11,500年前的恐狼牙齒以及72,000年前的頭骨中提取DNA序列片段。由於化石殘留的DNA往往隨時間久遠而分子產生改變與裂解（估計DNA最久可保存約100萬年），要得到完整且高品質的DNA序列難度高。本次團隊對這些DNA樣本進行高通量定序（deep sequencing），大幅提升序列的準確度，獲得了比以往其他恐狼研究還要高品質的DNA序列資料（>500倍覆蓋度）。他們從中篩選出具有意義的基因序列，作為後續基因編輯的基礎。
由於DNA必須要有細胞作為載體才有辦法發揮功能，研究團隊選擇了恐狼的現存近親物種之一的灰狼（Canis lupus）的細胞作為恐狼的基因載體。然而，這次的實驗並非真的把恐狼的所有DNA都置入灰狼的細胞內。灰狼的體細胞核內擁有39對染色體，染色體上總計約有 2 萬個編碼基因與近 9,900 個非編碼基因。就如前面所述，要從化石中取得完整的DNA序列是一項不容易的事情，加上整體基因數量龐大，因此研究團隊採取精選策略，只挑了其中14個灰狼基因修改成恐狼基因（修改一個基因可能需要花數週至數月的時間），來達到少許工程但又能讓基改生物外貌看似恐狼。
編輯的14個基因中，除了LCORL基因以外，目前Colossal Biosciences公司尚未公布其餘13種基因名稱，但可能包含控制毛色、胚胎發育、肌肉發育等相關基因。LCORL基因的功能主要就是控制骨骼發育。
研究團隊選用灰狼的血細胞作為這次的基因編輯標的。在採灰狼的血液樣本之後，將其中帶有細胞核的白血球分離出來，藉由近年最常運用的CRISPR/Cas9基因編輯技術將合成好的恐狼基因序列與原本灰狼染色體20個基因座（locus）上的14個同源基因做替換。隨後將編輯完成的血球細胞株的細胞核取出，轉移入無核的灰狼卵子內，促使其發育成胚胎。
這項實驗最終成功誕生了三隻外型酷似恐狼的基改寶寶，通體雪白，其中兩隻分別命名為羅穆盧斯（Romulus）和瑞摩斯（Remus），靈感來自羅馬神話的雙胞胎兄弟，於2024年8月1日時誕生；第三隻則是2025年1月31日誕生，叫做卡麗熙（Khaleesi），靈感來自《冰與火之歌》。
那麼，這些狼寶寶真的是恐狼嗎？
雖然Colossal Biosciences公司將本項研究稱為「去滅絕」（de-extinction），也就是復活已滅絕生物的過程，但實際上，他們只從上萬個基因中選取14個基因做修改而已，意思是狼寶寶仍有99.9%的基因還是灰狼的。換句話說，牠們其實是一種外表可能看似恐狼的基改生物，而非真正的恐狼本尊。
儘管復活恐狼的說法或許有誇大之嫌，但這項技術突破無疑為合成生物學開創了新的里程碑，其重要性不亞於當年複製羊桃莉的誕生。
水也佑 編
圖一：恐狼復原圖，感謝Erwin S. Christman提供
圖二：復活的「恐狼」寶寶，感謝Colossal Biosciences提供
參考影片：https://www.youtube.com/watch?v=d-8QESMOxe8
參考資料：
https://colossal.com/
美國新創生技公司Colossal Biosciences宣布了他們復活恐狼的突破性研究，更登上了《TIME》雜誌封面，引起不少關注。恐狼（Aenocyon dirus）是生活於12萬至1萬年前（更新世晚期至全新世早期）的一種犬科動物，身高約100公分，體長約180公分，曾廣泛分布於南、北美洲地區。此次Colossal Biosciences的研究團隊從11,500年前的恐狼牙齒以及72,000年前的頭骨中提取DNA序列片段。由於化石殘留的DNA往往隨時間久遠而分子產生改變與裂解（估計DNA最久可保存約100萬年），要得到完整且高品質的DNA序列難度高。本次團隊對這些DNA樣本進行高通量定序（deep sequencing），大幅提升序列的準確度，獲得了比以往其他恐狼研究還要高品質的DNA序列資料（>500倍覆蓋度）。他們從中篩選出具有意義的基因序列，作為後續基因編輯的基礎。
由於DNA必須要有細胞作為載體才有辦法發揮功能，研究團隊選擇了恐狼的現存近親物種之一的灰狼（Canis lupus）的細胞作為恐狼的基因載體。然而，這次的實驗並非真的把恐狼的所有DNA都置入灰狼的細胞內。灰狼的體細胞核內擁有39對染色體，染色體上總計約有 2 萬個編碼基因與近 9,900 個非編碼基因。就如前面所述，要從化石中取得完整的DNA序列是一項不容易的事情，加上整體基因數量龐大，因此研究團隊採取精選策略，只挑了其中14個灰狼基因修改成恐狼基因（修改一個基因可能需要花數週至數月的時間），來達到少許工程但又能讓基改生物外貌看似恐狼。
編輯的14個基因中，除了LCORL基因以外，目前Colossal Biosciences公司尚未公布其餘13種基因名稱，但可能包含控制毛色、胚胎發育、肌肉發育等相關基因。LCORL基因的功能主要就是控制骨骼發育。
研究團隊選用灰狼的血細胞作為這次的基因編輯標的。在採灰狼的血液樣本之後，將其中帶有細胞核的白血球分離出來，藉由近年最常運用的CRISPR/Cas9基因編輯技術將合成好的恐狼基因序列與原本灰狼染色體20個基因座（locus）上的14個同源基因做替換。隨後將編輯完成的血球細胞株的細胞核取出，轉移入無核的灰狼卵子內，促使其發育成胚胎。
這項實驗最終成功誕生了三隻外型酷似恐狼的基改寶寶，通體雪白，其中兩隻分別命名為羅穆盧斯（Romulus）和瑞摩斯（Remus），靈感來自羅馬神話的雙胞胎兄弟，於2024年8月1日時誕生；第三隻則是2025年1月31日誕生，叫做卡麗熙（Khaleesi），靈感來自《冰與火之歌》。
那麼，這些狼寶寶真的是恐狼嗎？
雖然Colossal Biosciences公司將本項研究稱為「去滅絕」（de-extinction），也就是復活已滅絕生物的過程，但實際上，他們只從上萬個基因中選取14個基因做修改而已，意思是狼寶寶仍有99.9%的基因還是灰狼的。換句話說，牠們其實是一種外表可能看似恐狼的基改生物，而非真正的恐狼本尊。
儘管復活恐狼的說法或許有誇大之嫌，但這項技術突破無疑為合成生物學開創了新的里程碑，其重要性不亞於當年複製羊桃莉的誕生。
水也佑 編
圖一：恐狼復原圖，感謝Erwin S. Christman提供
圖二：復活的「恐狼」寶寶，感謝Colossal Biosciences提供
參考影片：https://www.youtube.com/watch?v=d-8QESMOxe8
參考資料：
https://colossal.com/