臨床獸醫師該知道的病理組織處理秘訣!

• 取得檢體組織後要盡快泡入10%中性福馬林（neutral buffered formalin; NBF）固定，最好是在30分鐘內完成，否則在室溫下時間放置時間越久細胞變性的程度愈嚴重。如果一時之間手邊沒有福馬林的話可以先放冷藏（冷凍會讓細胞膨脹破裂），但原則上要盡快放入福馬林。組織跟福馬林的建議體積比例約1:10。為什麼特別強調要用中性福馬林勒？一般我們俗稱福馬林其實是甲醛（formaldehyde）氣體溶於水中所產生的溶液，在飽和濃度下（40% w/v）PH值大約是4左右。酸性的福馬林對組織固定有幾個缺點，首先是身體組織中的胺基酸大多帶有H+，由於本身帶有正電荷的關係，在酸性的環境下不容易與甲醛產生作用，換言之組織固定所需的時間會比較久。第二是酸性福馬林會與紅血球中的血紅素結合形成棕黑色的沉澱物，這會讓病理醫師在判讀時造成困擾。不過好加在市面上就有賣的固定組織專用的10%中性福馬林，所以可以不用哪麼麻煩自己泡製。另外甲醛對皮膚及呼吸道黏膜具有刺激性，處理時最好戴上口罩及手套。
• 裝組織的容器瓶口要夠大。組織經過福馬林固定後會變硬，所以如果瓶口不夠大的話可能會發生原本塞的進容器的軟組織在固定之後卻拿不出來的窘境。另外不建議用玻璃瓶裝，因為在運送過程中可能會被弄破。
• 太大的組織如果無法全部泡浸福馬林內（例如全乳腺切除的乳腺腫瘤），可以事前拍照做紀錄標示方位，然後切塊分段放進容器內。這邊要特別注意的是，如果要自行分切檢體，必須注意不要破壞團塊的邊界，否則會影響手術邊界是否有殘留腫瘤細胞的判讀。另外同一個容器如果放入多個檢體，可用打上不同數量的縫線做區分。由於組織泡過福馬林後顏色、質地都會改變，所以如果只是文字描述外觀，病理醫師收到檢體時可能會無法區別。

• 可以考慮使用組織標記染劑（Indian ink or tissue marking dye）做記號，在切片下可藉由辨識染劑顏色來確定組織邊界處是否有殘留的腫瘤細胞。不同的顏色可以用來表示不同的方位（前緣、後緣、側邊等等）。

• 很小的檢體（例如Tru-cut的組織）可以用表面光滑的紙包裹(例如手術手套的包裝紙)，然後放入包埋盒，或者直接放入eppendorf中，避免由於檢體體積太小而找不到。
• 扁平狀的組織（膀胱、胃、橫膈等）泡了福馬林後會像烤魷魚整個蜷曲，所以建議放入包埋盒，如果組織夠大也可以考慮用縫線固定在事先浸泡過福馬林或水的紙板上。
• 如果要在包埋盒上寫字做記號，千萬記得要使用鉛筆。用奇異筆或簽字筆的話會字跡被福馬林給溶掉。

• 整段切除的腸道要標示Orad（朝向嘴巴的那端）及Abrad（遠離嘴巴的那端），這樣如果病理診斷是腫瘤疾病且在某一側的手術邊緣殘留腫瘤細胞，假如要進行第二次手術時才知道要切哪一邊。標示的方法一樣也可以考慮用手術縫線比較簡單。如果是內視鏡採樣的腸胃道組織，一定要擷取一定厚度的組織樣本才有辦法做診斷，如果要區分貓的IBD與intestinal lymphoma更是建議開腹或腹腔鏡手術採全厚度的腸道組織做診斷。鼻腔黏膜的檢體也是一樣的原則，如果只擷取淺層的鼻黏膜組織通常都會得到不完整的診斷。

• 針對骨溶解的病灶，如果是以core biopsy的方式進行採樣，建議在同一個檢體下，擷取包含正常與異常部位的骨頭組織，在顯微鏡下可以做比較，如此一來比較容易分辨病變類型。
• 長在四肢的腫瘤如果進行截肢手術並且想要評估有沒有淋巴轉移，最好將淋巴結單獨分離出來用另外一個容器裝。泡過福馬林的組織會變的ininder，很難用觸感找到淋巴結的位置。
• 描述檢體的採樣部盡量清楚，例如：左側肩胛區域皮下團塊，而不是單純只寫左腳團塊，如果可以的話可以用相機記錄腫瘤部位，並將此照片提供給病理獸醫師參考。另外有些病變從外觀看不是很明顯（例如骨溶解），這種情況下最好附上X光或CT影像，這樣病理醫師才能正確地選取含有病灶的組織製作切片。
• 脾臟腫瘤如果還沒大到足以改變脾臟的外觀，這種情況下病理醫師要從一顆外觀完整的脾臟找到病灶是很困難的。所以脾臟整個切除的時候，第一線的臨床獸醫師需要先一片一片將脾臟切開，將有病灶的那片脾臟組織特別標記，這樣病理獸醫師才有辦法將病變區域挑出來做成切片。

參考文獻

1. DA Kamstock, EJ Ehrhart, DM Getzy, NJ Bacon, KM Rassnick, SD Moroff, SM Liu, RC. Straw, CA McKnight, RL Amorim, DBienzle, GD Cassali, JM Cullen, MM Dennis, DG Esplin, RA Foster, MH Goldschmidt, AD Gruber, E Hellmén, EW Howerth, P Labelle, SD Lenz, TP Lipscomb, E Locke, LD McGill, MA Miller, PJ Mouser, DO’Toole, RR Pool, BE Powers, JA Ramos-Vara, P Roccabianca, AD Ross, A Sailasuta, G Sarli, TJ Scase, FY Schulman, AM Shoieb, K Singh, D Sledge, RC Smedley, KC Smith, WL Spangler, B Steficek, PC Stromberg, VE Valli, J Yager, M Kiupel. Recommended Guidelines for Submission, Trimming, Margin Evaluation, and Reporting of Tumor Biopsy Specimens in Veterinary Surgical Pathology. Veterinary Pathology48(1):19-31 · January 2011.
2. R Thavarajah,VK Mudimbaimannar,J Elizabeth,UK Rao,K Ranganathan. Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation. Journal of Oral and Maxillofacial Pathology 16(3):400-5 · September 2012.
3. Formalin Fixative. https://www.surrey.ac.uk/sites/default/files/Formalin-Fixative.pdf
4. MD Willard, J Mansell, GT Fosgate, M Gualtieri, D Olivero, P Lecoindre, DC Twedt, MG Collett, MJ Day, EJ Hall, AE Jergens, JW Simpson, RW Else, RJ Washabau.Effect of Sample Quality on the Sensitivity of Endoscopic Biopsy for Detecting Gastric and Duodenal Lesions in Dogs and Cats. Journal of Veterinary Internal Medicine 22(5):1084-9 · September 2008.
5. SE Evans, JJ Bonczynski, JD Broussard, E Han, KE Baer.Comparison of endoscopic and full-thickness biopsy specimens for diagnosis of inflammatory bowel disease and alimentary tract lymphoma in cats. Journal of the American Veterinary Medical Association 229(9):1447-50 · December 2006.