如何在同時transfection兩種plasmid時送等量?
更新於 2024/12/21閱讀時間約 1 分鐘
transfection最難的情況莫過於兩種，第一種是送不進去，最好的方式就是檢查plasmid濃度品質(260/280)，並且利用DNA電泳查看質量如何。
第二種令人頭痛的情況就是送的蛋白質不等量，整組實驗跟你說掰掰。最好的解決方法就是先進行測試，先去處你的變因，在白紙上進行DNA的測試，檢查actin或tubulin並且檢查tag是否都均等，當然最好也要檢查你送入的DNA本身。
舉例我分別送入EGFP與EGFP-Aurora-A。那我勢必要檢查EGFP與AuroroaAurora-A。
為何要做這種檢查呢？首先要防止細胞吸收不同DNA時的效率不同，再來就是要避免其實他送入的量相同，但因為送入的東西對細胞內部進行了修飾而造成差異性。這樣就能夠排除這些變因。
重點來了，那如果我同一盤細胞要送入兩個不同的DNA該怎麼辦？用一樣的方式送會遇到問題嗎？在這邊我沒辦法跟你掛保證會不會遇到問題。但我能肯定的是如果遇到問題該怎麼解決。
由於剛剛有提到細胞收入不同的DNA會有不同的效果，那同時送入兩種如果一個效果好一個效果差可能就會打壞你送等不等量的平衡。因此我建議先分別將兩種DNA與polyjet 混合好之後。等待DNA確定都進入脂肪微粒中，再將兩種分別混好的DNA送入細胞中，這樣DNA混合polyjet 的能力相同，細胞比較不不會出現「偏食」的情況。
這是我在多次嘗試後得到的結論。當然這方法可能也會有漏洞，沒辦法適用於全部的plasmid中。如果有遇到什麼其他問題或是建議也歡迎一起討論。
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