(轉貼)人造胚胎體外培植 - 騙胚胎在卵子裡面的技術

(轉貼，來自澳洲量子醫學研究者整理)

人造胚胎體外培植 - 騙胚胎在卵子裡面的技術

1978年體外授精

2016年體外培植小老鼠出生

表面立意是，為了讓同性有下一代，多人的體細胞合一，植入胚胎顆粒狀細胞，而胚胎顆粒狀細胞需要活體取用，小老鼠實驗成功(從小老鼠母親的尾巴培植)，但人體目前是無法，因為胚胎顆粒狀細胞，需要殺掉一個胎兒而取得，在醫院生產的胎盤，會被他們拿去實驗。

雖然這個技術，對於求子不得的人們，以及等待器官移植者，可能會是福音，但是這個技術落在邪惡的人手中時，會是製造人造人，人類是可以預購的，10年內讓人類滅絕，然後不需要現在不聽話的人們，這世界變成複製人，基因改造，吃蟲就可以了，然後你一無所有，但是你很快樂。

技術論文整理如下：

如何將皮膚細胞，培育成人類胚胎

透過體外配子發生（IVG）可以更瞭解，目前配子發生（配子開發）和導致不孕的各種因素，這項技術原是針對遺傳疾病而研發，它還規定癌症婦女不孕。最近，除了體外受精之外，科學開始為同性群體帶來新的革命，不孕率也降低了。各種來源的體外配子，包括胚胎幹細胞和誘導多能幹細胞，已在非人類動物中，產生了健康且有生育能力的後代，並且已經產生了人類IVD配子（精子和卵子）。

將來IVG會被人類當作，一種輔助生殖技術（ART），從而改變遺傳育兒的模式，（Notini 等，2018）。再生醫學也成為21世紀，治癒遺傳性疾病的方法，幹細胞技術可再生新器官，消除對器官摘取的擔憂。在這篇文章中，將討論什麼是IVD技術，科學家，如何將皮膚細胞培育成人類胚胎，IVD配子創建技術：

幹細胞的三種來源：

從誘導多能幹細胞中，創建IVD配子，涉及對個人的體細胞（皮膚細胞）進行基因重編程，使其成為iPSC，並將這些iPSC分化為IVD配子，這些配子可與其他IVD配子（或非IVD配子結合）進入體外。IVD配子也是從使用體細胞核移植（CRISPR / Cas9）編輯的克隆胚胎中，提取的ESC產生的。最後，IVD配子可以從通過IVF創建的胚胎中獲取的ESC中獲得。第一和第二的方法，是用來自一位準父母的IVD配子，與另一位準父母的非IVD配子在體外結合，產生的孩子，與IVD配子的父母分享一半的DNA，四分之一與提供IVD配子的父母，四分之一與配子捐贈者。

IVG如何將皮膚細胞發育成胚胎

解說人造胚胎，在女性生殖生物學中，濾泡生長於卵巢之中，它們是一個個圓球狀的細胞聚合體，每個濾泡之中都會有一個卵母細胞（也就是卵子的原形），這些結構在經過周期性的生長和發育之後，最終在排卵時，釋放出一個發育完全的卵子。卵母細胞被包裹在粒層細胞層之中，而它們又被包裹在一層薄膜之中，這層薄膜名為胞外基質（濾泡基質膜或叫基片），最終構成一個完整的濾泡。在下面圖裡是原始濾泡，經過細胞內的變化。這些原生殖細胞（PGCs）的數量在有絲分裂下，不斷成倍增加，而一旦它們到達了性腺皺褶，它們就可以被稱為卵原細胞（二倍體的卵巢幹細胞）。性腺皺褶主要由間葉細胞、和中腎下層的細胞組成，一旦卵原細胞進入這裡之後，它們就會嘗試與體細胞結合，並持續發展，直到卵原細胞周圍生成了一個細胞層，進入了粒層細胞前期階段。（圖一）

了解濾泡以後，來看原始生殖細胞（primordial germ cell ），維基百科寫說，生殖細胞在早期，由多能細胞產生，為原始生殖細胞（PGC）。PGCs通過發育中的後腸內胚層和腸系膜遷移，並定植於胚胎性腺，在雌性中增殖為卵原細胞，在雄性中增殖為生殖母細胞，並啟動性二態性發育，也就是未受精前的生殖細胞，多功能幹細胞，可發展出不同的身體的細胞。IPS細胞稱為誘導多能幹細胞，源自皮膚細胞（體細胞）皮膚活檢。這些IPS發育成原始生殖細胞（PGC樣細胞），然後使生精幹細胞進入胎兒、新生兒睾丸，或胎兒顆粒細胞，培養後產生可存活的卵母細胞，目前醫學界，已成功的做人類原始生殖細胞。

誘導多功能幹細胞，如何來的，請見（圖二）是一種用強制性表達的重新編程，也就是CAISPR/Cas基因剪輯做DNA插入修改的動作。

誘導多功能幹細胞可以做什麼？可做成神經細胞、神經元、心肌細胞，和紅血球…等。在2008年歐巴馬上台時，把百年來體細胞，不能做成胚胎細胞的禁忌解除，這發展是福奇的美國國衛院的跨國專案。

首先通過用胚胎卵巢體細胞、重建卵巢（rOvaries）培養mPGCLS來重建卵子發生，所得卵母細胞已產生後代。該系統揭示了卵母細胞發育的關鍵機制，包括在小鼠ESC中產生卵母細胞樣生長的轉錄因子，通過用小鼠胚胎睾丸體細胞（重組睾丸（rTestes））培養mPGCL，重建了mPGC精原細胞的發育，所得精原細胞在體外繁殖，並在移植到睾丸後有助於精子發生。

培養胎兒顆粒細胞（只能從胎兒顆粒細胞中獲取，成人顆粒細胞不行）。它是在早期胚胎9-10天的體外重建的，IVD是首先分化的初級卵泡，然後進行次級卵泡ivg、ivm，只需一天的時間即可使具有生物活性的GV成熟。

生物科技的實驗使用小鼠PGC樣細胞，試驗成功的的從小老鼠的尾巴，皮膚細胞變成一隻小老鼠，讓我們看看如何做，小鼠，原始生殖細胞PGC（mPGC）起源於胚胎6.5天左右的最近端外胚層。被轉錄因子（TF）：BLIMP1、PRDM14和TFAP2C激活，轉錄因子對於mPGC規範至關重要，就是對原始生殖細胞的規範，涉及體細胞程序的抑制、多能性網絡的重新獲得和表觀遺傳重編程。E5.25至E6.25左右的外胚層細胞，表現出響應BMP4（骨形態發生蛋白）分化為mPGC的能力。

圖四中：早期胚胎9-10天的體外重建時，IVD是首先分化的初級卵泡，然後進行次級卵泡ivg、ivm，只需一天的時間，即可使具有生物活性的GV成熟。

這裡就是在體外重組，多功能幹細胞，包括植入胚胎前胚胎幹細胞（ESCs）和從體細胞經過轉錄因子，重新組裝過的誘發多功能細胞。這個幹細胞是最重要，體外配子的程序中先決的來源，現在已可商業購買，而且還附加說明如何製作的技術。在上面那個圖在體外，要有胚胎幹細胞，和類原始生殖細胞，去重建的過程，注意這裡說在重建過程中，需要使用基因編輯系統，在近期CRISPR/Cas9系統，用於未來人類幹細胞的編輯。（Zhang, et al , 2017）

用皮膚細胞製造精子和卵子步驟一（圖五），原始生殖細胞，表觀遺傳編程譬如DNA去甲基化，基因組印記擦除，和組蛋白修飾，這是對最後的生殖細胞分化至關重要。

誘發多功能幹細胞可以通過培養體細胞（如皮膚）來準備，只需四個已知的基因（可以在商業上購買）。可以只使用三個基因，但最初描述的，所有四個基因都是最好的：KLF4、SOX2、OCT4和C-MYC。

註解：科學家們已經能夠在體外從小鼠ESC中誘導出EpiSC樣細胞，這些細胞被稱為外胚層樣細胞（EpiLC）。許多研究已使用EpiLC作為實際植入後，衍生的外胚層幹細胞的，合適類似物，特別是在嘗試恢復到“原始”狀態時。培養胎兒的顆粒細胞(granulosa cells)（只能從胎兒顆粒細胞中獲取，成人顆粒細胞不行）。

從皮膚細胞製造精子和卵子，步驟二

體外標記卵母細胞的概述，卵巢組織，不像皮膚細胞，那樣容易培養成卵母細胞。當原始生殖細胞準備好時，進入ivd體外衍生卵母細胞，原代的卵母細胞，要經過減數分裂一和減數分裂二，並停在減數分裂ii的（mii）中期，在這時期體外可以用，誘發基因和蛋白質進行。

原始卵泡被FOX 3和其他因素“鎖定“。利用細胞外基質（ECM）和皮質組織壓力，控制原始卵泡募集和卵巢壽命。ECM是細胞微環境中的，結締組織可以增加組織壓力。

時間發展的過程：

卵母細胞體外培養，用皮膚細胞製造精子和卵子

聖路易斯不孕不育中心的Sherman Silber博士說，我們的團隊現正成功製造，原始生殖細胞PGC，但有挑戰，在將這項小鼠技術，應用於臨床人類之前，還有一些附帶條件需要解決。

1. 需要在胎兒體細胞性腺細胞（女性顆粒細胞）中培養PGC（男性新生兒睾丸），如何獲得人類胎兒體細胞性腺細胞？

2. 體外研究人類細胞，但小鼠卵巢無法，為人類卵原細胞的減數分裂，進入提供適當的信號。添加外源人類信號部分，或添加重編程的人類顆粒細胞，可能支持更有效地誘導減數分裂和卵原體發育。

人類解決方案：

幹細胞再生治療與基因編輯CRISPR/Cas 9系統

CRISPR/Cas9基因組編輯系統的，引導RNA和Cas9核酸酶核心組件，通常用於幹細胞治療，人類多能幹細胞，包括胚胎幹細胞和誘導多能幹細胞，是基因敲除的理想（把有問題的基因打入一個基因程序，在特定的有問題基因序列上，剪一段下來再輸入一段新的，來改變這條基因使它失能）選擇。就是利用CRISPR/Cas9敲除人類，多能幹細胞中的相關基因，以探究其衍生細胞（幹細胞，甚至腫瘤細胞）的致病機制，並用於藥物篩選，根據2017年的研究，79%的遺傳性疾病 編輯系統使用Crispr

然而，CRISPR/cas9仍然有一些問題需要考慮。這是很容易丟失的目標，和編輯效果和傳遞路徑。有多種途徑可以交付編輯系統，微量注射通過，玻璃微量移液器，將底物逐一注入靶細胞，最高可達100%。

減慢病毒——介導的，是CRISPR/Cas9傳遞的常見載體。通過感染人體幹細胞，它更穩定、更有效，但不受控制的基因突變，和整合缺陷型慢病毒會降低感染率。

AAV-介導使用AAV病毒，在病毒包裝過程中使用質粒，從而獲得更高的感染效率。因為2017年-2018年的研究論文非常活躍，大部分中國科學家，這是一個非常有趣的發現，因為在新冠疫情之前。然而，最近AAV成為針對不同器官的基因治療，甚至對人類大腦也起作用，這對人工智能來說是一個巨大的警報。

新穎的目標遞送法，當細胞和質粒的混合物快速通過芯片時，含有微收縮的芯片可以通過機械變形在細胞上產生瞬時膜孔，以遞送CRISPR/Cas9質粒。最近研究的納米藥物，遞送系統已用於CRISPR/Cas9基因修飾系統，這是中國的發明的方法，也是新冠疫苗，和空氣水的大量化學物質的噴灑有關，對未來人類生殖和腦機接口有很大的隱憂。