高效能液相層析法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)隨著搭配的移動相、管柱以及偵檢器的不同,可以分析的樣品種類很多元,是個很強的分析儀器。近幾年也開發出更高階的機台「UPLC」,操作與 HPLC 相似(但移動相須過0.2um濾膜),甚至可以藉由轉換器將 HPLC 的參數直接做調整應用於 UPLC 上可大幅縮短分析時間。
分析原理
移動相 - 等比例沖提 Isocratic elution
- 梯度沖提 Gradient elution
- 增強分離能力、有效減少分離時間
Notice 在線混和 mobile phase有時容易產生氣泡,溶劑須做好gegas
管柱(依分離模式做分類) - 正向 Normal phase
- 使用低極性溶劑,若要長時間使用機台需更換管路。
- 逆向 Reverse phase
- 離子交換 Ion exchange
- 粒徑篩析/膠體 Size exclusion/Gel (SEC or GPC)
Notice 非常用溶劑要先確認此溶劑濃度對於管線有沒有傷害
USP 針對管柱也有做自己的分類,甚至可以找到藥典上的分析管柱是使用「哪一型 號」的管柱。
偵檢器種類 - 紫外/可見 UV/Vis
- 光電二極體陣列 Diode array detectors, PDA - 全波長偵檢器,主要用來判斷peak purity
- 折射率 Refractive Index, RI - 無法搭配梯度沖提,機台與管柱平衡時間較長
- 揮發性光散射偵測器 Evaporate light scattering detector, ELSD - 數據再現性不穩定,在規格方面或許要放寬
- 質譜 Mass spectrometry, MS
- 電化學 Electrochemistry
- 導電度 Conductive
- 螢光 Photoluminescence detector, FLD
LC 「眉角」實在太多了,LoMei 只針對自己用過的然後有特別需要注意的地方做簡述。可能是之前太混,還記得第一次聽到叫我去借 Normal phase 機台時臉上滿臉問號?那是 HPLC 的一種嗎?只有一片空白。