助孫權抗曹
建安十三年（208年），曹操率領八十萬大軍南下，意圖消滅孫權，統一天下。孫權面臨生死存亡的危機，他召集群臣商議對策。當時，有人主張投降曹操，以求自保，但周瑜堅決反對，他說：“曹操是個奸雄，他的野心是要吞併天下，不會容忍我們的存在。如果我們投降了，就是自取滅亡。我們應該與劉備聯合，共同抵抗曹操。”周瑜還說：“我願以死為誓，一定要打敗曹操。”周瑜的話激起了孫權的鬥志，他決定與曹操決一死戰。周瑜被任命為大都督，統領水陸兵馬，與劉備的軍師諸葛亮合作，佈置赤壁之戰的火攻計劃。周瑜先派魯肅去荊州聯絡劉備，並借荊州兵馬。魯肅回來後，告訴周瑜劉備已經答應了，並派了趙雲、張飛、關羽等將領來助戰。周瑜又派魯肅去說服黃蓋假投降曹操，並用火船攻擊曹操的艦隊。周瑜還派人去散佈謠言，說江南有瘟疫，讓曹操的士兵服用苦艾草來預防。這樣一來，曹操的士兵都口乾舌燥，渴望飲水。
建安十三年（208年）冬十月（11月），赤壁之戰爆發了。黃蓋率領二十餘艘火船，在東風助力下沖向曹操的艦隊。曹操的艦隊因為用鐵鏈相連而無法躲避，很快被火船撞上並引燃。火勢蔓延至岸上的營寨，曹操的大軍陷入混亂之中。周瑜、劉備、趙雲等率領水陸兵馬乘勢發動總攻，大敗曹軍。曹操只得帶著殘兵敗將逃回北方。赤壁之戰是中國歷史上最著名的戰役之一，它打破了曹操一統天下的局面，奠定了三國鼎立的基礎。
攻取南郡
赤壁之戰後，周瑜率軍追擊曹操，在江陵（今湖北江陵縣）與劉備會合。他們商議接下來的行動，周瑜建議先攻取南郡（今湖北荊州市），然後進軍西川（今四川），以擴大自己的勢力範圍。劉備同意了周瑜的建議，並派了關羽、張飛等將領隨周瑜一同出征南郡。南郡太守劉琮是劉備的侄子，但他卻向曹操投降了。周瑜攻打南郡時，劉琮派了曹仁、文聘等將領來抵抗。周瑜與曹仁等人交戰了數月，未能攻克南郡。周瑜想出了一個計策，他假裝生病，讓魯肅去向曹仁求和，並說周瑜願意歸降曹操。魯肅還送給曹仁一封信，信中寫著周瑜的病情和投降的條件。曹仁看了信後，以為周瑜真的要投降了，就放鬆了警惕。周瑜趁機率軍突襲曹仁的營寨，大敗曹軍，迫使曹仁退守江陵。周瑜又派人去說服劉琮投降，劉琮見勢不妙，就帶著家人逃往曹操那裡。周瑜遂攻占南郡，並派人去追趕劉琮。病逝巴丘-發燒幾次就掛了
周瑜攻下南郡後，就想繼續進軍西川，實現他的征伐益州的戰略構想。然而，在準備出發的時候，他突然發高燒，身體不適。他知道自己的日子不多了，就召集了魯肃、呂蒙、甘寧等部下，囑咐他們要忠於孫權，輔佐孫權成就大業。他還對魯肃說：“我死後，你要好好輔佐孫權，並且要和諸葛亮保持友好關係。”魯肃等人聽了周瑜的話，都哭泣不已。建安十五年（210年）二月（3月），周瑜在巴丘（今湖南岳陽市）去世。
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