儘管鄂圖曼帝國取代馬穆魯克王朝成為新一代伊斯蘭世界共主，他們很快發現，自己也繼承了前任在印度洋面臨的難題，挑戰剛剛建立的葡萄牙霸權。
葡萄牙艦隊
鄂圖曼帝國海軍船隻
1520年代後期到1530年代中期，鄂圖曼帝國的軍人、專家與商人陸續進入印度西部沿岸城邦，逐步重拾過去馬穆魯克王朝在此區的影響力，並為接下來和葡萄牙全面開戰打下基礎。這段時期鄂圖曼帝國結束和波斯 (Persia) 的戰爭，並在東歐徹底擊敗匈牙利，得以騰出手擴充紅海艦隊。
黃色部分為前馬穆魯克王朝勢力範圍
1538年，鄂圖曼帝國的紅海艦隊浩浩蕩蕩朝印度西北部的第烏 (Diu) 進攻，這是繼1509年二月之後，葡萄牙和穆斯林聯軍在相同地方的第二次戰爭。只不過這次攻守易位，葡萄牙變成第烏的防守者，而穆斯林聯軍的領導者換成鄂圖曼帝國。
鄂圖曼帝國在九月初發起進攻，穆斯林聯軍在人數上佔壓倒性優勢(超過兩萬對比大約一千葡軍)，船隻噸位與火力比起葡萄牙也不遜色；而葡萄牙的優勢則在於堡壘才剛更新升級過，而且在距離不遠的半島上也有堡壘駐軍，可就近相互支援。穆斯林聯軍必須把握時間，在來自果阿 (Goa) 的葡軍主力到來前，盡快攻下第烏；而葡軍則須以現有的條件死守到援軍到達。
當穆斯林聯軍進入被葡軍放棄的第烏市區時，就開始發起掠奪，這引起當地貴族不滿，也使關係本已不太牢靠的聯軍更加惡化。穆斯林聯軍一方面全力攻打葡軍據守的堡壘 (Fortaleza de Diu)，另一方面也攻打距離不遠半島上的堡壘。在成功攻下半島堡壘並俘虜葡萄牙守將後，原本想藉此勸降第烏堡這邊的葡軍守將。宣告失敗後只得加緊攻城。
鄂圖曼與古及拉特組成的穆斯林聯軍
經過近兩個月的攻打，聯軍一度突破堡壘城牆，迫使葡軍動員當地百姓上場。但由於聯軍內部持續擴大的裂痕，以及過於謹慎保守的用兵，使聯軍沒能堅持到最後一刻，給予葡軍喘息之機。第烏當地貴族由於不滿被掠奪，拒絕為聯軍提供補給，這使人數龐大成為聯軍最致命的壓力；再加上參與進攻的鄂圖曼海軍一直怕被從果阿而來的葡軍主力夾擊，而避免投入大規模交戰。最終穆斯林聯軍宣告撤退。1538年九月第烏戰役，葡軍相當驚險地守住第烏堡。
葡軍火鎗兵
這場第烏戰役的失敗，使鄂圖曼帝國損失慘重：他們在印度十幾年的苦心經營，如今面臨影響力消退的事實；利潤豐厚的香料貿易，依然掌握在葡萄牙人手裡，甚至使長期和伊斯蘭勢力合作的威尼斯商人 (Comerciante de Veneza)，也不得不向葡萄牙人購買香料。
不過鄂圖曼帝國在波斯灣及亞丁打造的造船廠，依然得以持續建造並維持艦隊，還迫使葡萄牙放棄對紅海長達三十年的封鎖，從紅海 (Mar Vermelho) 經亞丁灣 (Golfo de Adem) 到阿拉伯海 (Mar Árabe) 再到印度西北部，鄂圖曼帝國依然能夠在近海地區維持自己的貿易航線。
接下來葡萄牙和鄂圖曼帝國雙方都將盡可能在環印度洋周邊尋找潛在盟友，而他們不約而同都把目標聚焦到東非...
