上次跟大家分享ABI5與RUP把離層酸與紫外光傳導給連起來,這次要跟大家分享水楊酸(SA,salicylic acid)與藍光的光傳導也有關!
到底是怎麼發現的呢?
一開始,研究團隊注意到,將種子以水楊酸處理會導致胚軸變短。而且,只在有藍光的時候以水楊酸處理才會發生這種效果,如果沒有光的話,就算用水楊酸處理,也不會有這種效果。這意味著,水楊酸可能與植物對藍光的反應有關。
於是,研究團隊進行了一系列的測試,看看不同突變株對水楊酸的反應。他們找了一些與光形態發生有關的突變株,結果發現,少了pif基因的突變株們,尤其是pif4突變株,可以讓植物在有水楊酸的狀況下照樣伸長胚軸。
這就讓研究團隊覺得非常好奇!由於之前已知NPR1是水楊酸的受體,因此他們想知道,NPR1和PIF4之間是否有互動?如果它們之間的確有互動,CRY1與NPR1-PIF4途徑的關係又是如何呢?
首先,透過追蹤PIF4蛋白在不同條件下的含量,他們發現,PIF4的分解需要NPR1。在野生種植物中,藍光會讓PIF4快速消失;但是在npr1突變株中,PIF4的分解就明顯地減少了。相對的,當高度表現NPR1時,PIF4的分解就變快了。
那麼,NPR1是如何促進PIF4分解的?透過序列比對,已知NPR1含有BTB/POZ結構域,而這個結構域是CUL3受質接頭蛋白的特徵結構。所以,NPR1可能作為CUL3受質接頭蛋白,參與形成E3泛素連接酶複合體。
為了要證明NPR1是透過形成E3泛素連接酶複合體來促進PIF4分解,研究團隊進行了體外泛素化實驗。他們證明NPR1可作為E3連接酶的接頭蛋白並直接促進PIF4的泛素化。而檢測植物細胞時也發現,在npr1突變株中PIF4泛素化減少,高量表現NPR1時則PIF4泛素化增加。這顯示了,NPR1的確與PIF4的泛素化有關。
泛素化的PIF4,是否就是被送到26S蛋白酶體去分解掉呢?當研究團隊使用蛋白酶體抑制劑MG132處理,發現MG132可以阻止PIF4的分解,這就證明了PIF4的分解過程需要26S蛋白酶體。
那麼,PIF4到底是哪裡被泛素化了?研究團隊以質譜分析找到了PIF4上的泛素化位點,分別是Lys129、Lys252和Lys428。當他們把這些位點進行突變之後,PIF4不僅不再被泛素化,也不能被分解了。
更有意思的是,當研究團隊把無法被泛素化的PIF4突變基因(3KR)放到野生種植物中,結果野生種植物出現與npr1突變株相似的性狀。這意味著,NPR1透過這些位點的泛素化來調控PIF4的量。
所以,PIF4的確與NPR1有互動。
既然水楊酸可以讓植物在藍光下胚軸變短,那麼應該就是與隱花色素(CRY)有關。於是,研究團隊進行了一系列的實驗來弄清楚隱花色素與NPR1-PIF4之間的關係。
首先,他們在菸草和阿拉伯芥原生質體中測試。他們發現,加入CRY1/CRY2後,NPR1和PIF4的互動明顯增強;接著,他們在在菸草中表現NPR1、PIF4和CRY1,發現CRY1不只可以讓NPR1和PIF4的互動增強,還能提高NPR1主導的PIF4分解。由於使用PIF4(3KR)時,即使有CRY1存在PIF4(3KR)也保持穩定,顯示這種增強效應是透過泛素化位點來達成的。
進一步的測試發現,在cry1cry2雙突變株中,幾乎檢測不到泛素化的PIF4,而在高度表現CRY1或CRY2的植株中,PIF4泛素化明顯增加。這些結果意味著,隱花色素的確與PIF4的泛素化有關,且這個作用是透過增強NPR1和PIF4之間的互動來達成的。
更有意思的是,他們還發現NPR1主導的PIF4泛素化,在無光的環境中幾乎不發生,但是在藍光照射下明顯增強,所以這個整過程是需要藍光的。
總而言之,研究團隊從不同角度證明了隱花色素會透過增強NPR1-PIF4的互動,來促進PIF4的分解,而且這個調控過程需要藍光。
水楊酸是植物用來抵抗外敵的重要分子。過去大家都認為PIF4只有跟光信息傳導有關,雖然也有一些賀爾蒙(如生長素、吉貝素、離層酸、芸苔素內酯)與光形態發生有關連,但是抵禦外敵的分子與光形態發生有關?這真的還是頭一遭呢!
參考文獻:
Zhou, Y., Liu, P., Tang, Y., Liu, J., Tang, Y., Zhuang, Y., Li, X., Xu, K., Zhou, Z., Li, J., He, G., Deng, X. W., & Yang, L. (2024). NPR1 promotes blue light–induced plant photomorphogenesis by ubiquitinating and degrading PIF4. Proceedings of the National Academy of Sciences, 121(52), e2412755121. https://doi.org/10.1073/pnas.2412755121